별첨 1

◎ 형 태 : 몸길이 12~15mm이다. 가슴의 등쪽은 구릿빛 갈색과 녹색을 띠고 있고, 배의 등쪽에는 녹색과 황갈색의 세로 줄무늬가 있다. 윗입술은 희미한 황색이며, 앞가두리각은 약간 둥글며 튀어나와 있다. 중앙에 날카로운 이빨이 있다. 눈 사이는 오목하다. 딱지날개의 중앙에 있는 한 쌍의 긴 세로 줄무늬와 바깥쪽 가장자리의 무늬는 황색이며, 전체가 점무늬로 덮여 있다. 수컷의 딱지날개는 끝이 뾰족하고, 암컷은 안쪽으로 오므라든 형태를 보인다.

◎ 생 태 : 해안 사구가 발달한 곳에서 서식하며, 성충은 7~8월에 나타나 활동한다. 육상 곤충들 가운데 가장 빠른 종류에 속한다. 자기 몸보다 작은 곤충에 대해서 맹렬한 포식성을 보인다. 길앞잡이류의 가장 큰 특징은 턱인데, 몸 길이의 10%에 이르는 길며 날카롭고 강력한 턱이 있어 어떤 곤충이든 잘 잡아먹는다. 유충도 포식성이어서 다른 길앞잡이류처럼 땅속에 수직굴을 파고 그 속에 있다가 나방 유충이나 개미를 잡아먹는다. 개미귀신이라고도 불린다. 해안사구 환경 보전의 척도가 되는 지표종으로, 환경이 조금만 오염되어도 사라져서, 지금은 거의 찾기 어렵다. 2009년 태안의 해안사구에서 발견되었다.

나) 멸종위기동물의 Genome survey

(1) Library QC data

- DNA Library QC

Delivery name

Tape

Concentration

(ng/ul)

Volume

(ul)

Tape Quantity

(ug)

Main peak Size

(bp)

Result

닻무늬길앞잡이

129.859

5.844

470

pass

그림입니다.
원본 그림의 이름: Ca_DNA_QC.jpg
원본 그림의 크기: 가로 1387pixel, 세로 679pixel
사진 찍은 날짜: 2017년 11월 13일 오후 13:58
프로그램 이름 : Adobe Photoshop CC (Windows)

- RNA Library QC

Delivery name

Tape

Concentration

(ng/ul)

Volume

(ul)

Tape Quantity

(ug)

Main peak Size

(bp)

Result

닻무늬길앞잡이

373.276

11.198

291

pass

그림입니다.
원본 그림의 이름: Ca_RNA_QC.jpg
원본 그림의 크기: 가로 1387pixel, 세로 679pixel
사진 찍은 날짜: 2017년 11월 13일 오후 13:48
프로그램 이름 : Adobe Photoshop CC (Windows)

(2) 고품질 genomic DNA 채취 및 표본확보

- 검수용 DNA는 대부분 만족하였고, 멸종위기종인 대상종들은 채집량의 제한으로 인해 확증표본으로 제출 가능한 표본을 확보하지 못하여 사진으로 대체하고자 함.

검수용 샘플 DNA 농도 및 총 양 현황표
Sample 명	농도(ng/ul)	Volume(ul)	DNA 총량(ug)	O.D A260/280	추출일자	저장장소
닻무늬길앞잡이	274	300	82.2	1.94	170927	1XTE pH8.0

(3) 기타분석

A. Genome Size estimation – Jellyfish 프로그램

각 대상종을 대상으로 Jellyfish 프로그램으로 Genome size를 예측한 결과는 아래와 같다. 각 분석은 k-mer 값 17mer, 19mer, 21mer를 대상으로 하였고 그것을 통해 예측된 genome의 크기는 Estimation genome size 에 표시되었고, 이를 통해 이번 사업에서 분석한 서열의 양의 coverage는 Genome coverage depth(Coverage Depth)에 표기되었다. 그리고 각 종의 표 아래 그래프는 kmer값 별로 나타난 depth의 예측 그래프로 peak값을 확인할 수 있다.

샘플명	K-mer (K-mersize)	Estimateddepth (K-merCoveragedepth)	Genomecoveragedepth (Coveragedepth)	Estimatedgenome size
닻무늬길앞잡이	17	18	20.13	748,999,252.5
	19	18	20.44	737,902,967.3
	21	18	20.75	726,806,682.1

그림입니다.
원본 그림의 이름: CLP00000894751e.bmp
원본 그림의 크기: 가로 828pixel, 세로 388pixel

B. 반복서열

- 시퀀싱이 완료된 샘플 DNA 의 contigs 중 1kb 이상의 contigs의 반복서열을 탐색 (Repeat masking results of DNA contigs)

닻무늬길앞잡이는 Reference로 16,165 bp 크기의 Tachyta nana 미토콘드리아 genome을 이용하여 맵핑하였다. 갭은 4,870 bp 로, Coverage 는 69.87.3%로 확인되었다.

닻무늬길앞잡이의 KOG 결과, “Infomation Storage and Processing” 부분에서는 transcription 관련과 3.5%로 가장 많이 매칭되고, “Cellular Processes and Signaling” 에서는 signal transduction mechanisms (9.9%), post translational modification (6.6%) 으로 많이 매칭된다. “Metabolism” 부분은 평균 1% 대로 낮게 매칭되고, Multiple Function 은 24.2% 이다.

닻무늬길앞잡이의 GO 결과, Biological Process에서 membrane (1,150개), cell (1,114개) 순으로 많이 매칭된다. Molecular Function 에서는 binding (1,901개), catalytic activity (1,705개) 순으로 가장 많이 매칭된다. 또한, Cellular Component 부분에서는 cellular process (1,708개), metabolic process (1,610개), single-organism process (940개) 순으로 많이 매칭된다.

(4) Microsatellite 후보군

A. SSR statistics

닻무늬길앞잡이
Repeats	4	5	6	7	8	9	10	11	12	13	…	Total
Di	0	0	1097	693	491	310	177	177	110	29		3,576
Tri	0	1448	598	380	242	36	44	22	12	12		2,831
Tetra	400	92	38	25	6	3	0	0	0	0		565
Penta	55	24	0	4	1	0	0	0	0	0		85
Hexa	95	18	8	3	0	0	1	0	0	0		125
Total	550	1582	1741	1105	740	349	222	199	122	41		7,182

→ SSR 검색결과 총 7,182개의 SSR 서열을 확인할 수 있었으며, Di motif 가 3,576개로 가장 많이 존재하는 것을 확인 할 수 있었으며, 이를 기반으로 하여 SSR marker 후보군에 대한 primer 를 7,784개를 디자인 하였다.

→ 각 종의 유전자를 분석하여 그 종을 구별할 수 있는 primer를 만든다. primer 의 조건은 Motif 약 4~6개이며, Forward 와 Reverse primer 가 18~22개 정도이고 Tm값이 54.5~55.5 정도가 적당하다.

올해 17년도에 채집한 6종의 유전자를 분석하여 그 종을 구별할 수 있는 Barcode 서열을 만들었고, 그 Barcode 서열을 가지고 NCBI (National Center for Biotechnology Information) 사이트에 있는 BLAST (Basic Local Alignment Search Tool)을 이용하여 결과를 확인하였다. 각 종의 서열들의 BLAST 결과 마커로서 주로 사용되는 COI 서열과 매치되는 것으로 보아 바코드 서열로 사용가능할 것으로 사료된다.